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殘留溶劑方法建立及方法學(xué)的驗證
一、概述
藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中、以及在制劑制備過程中使用或產(chǎn)生而又未能完全去除的有機溶劑。根據(jù)有機溶劑對人體及環(huán)境可能造成的危害的程度,ICH將有機溶劑分為避免使用、限制使用、低毒和毒性依據(jù)尚不足四種情況。因殘留溶劑會影響產(chǎn)品的安全性,故需對其進行研究。
二、研究方法的建立及方法學(xué)驗證
在確定了需要進行殘留量研究的溶劑后,需要通過方法學(xué)研究建立合理可行的檢測方法。目前,殘留溶劑的測定一般采用氣相色譜法(GC法),此法具有檢測靈敏度較高,選擇性較好的特點,且所需的樣品用量較少,基本可以滿足所有殘留溶劑測定的要求。采用GC(氣相)法時,需要結(jié)合藥物和所要檢測的溶劑的性質(zhì),通過方法學(xué)研究確定合適的檢測條件。
1、研究方法的建立
1.1 色譜柱選擇
按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂漬適宜固定液的填充柱。測定含氮的堿性有機溶劑時,由于普通氣相色譜儀的不銹鋼管路、進樣器襯管等對有機胺等含氮的堿性化合物具有較強的吸附作用,致使其檢出的靈敏度降低。通常采用弱極性色譜柱或經(jīng)堿處理過的色譜柱分析含氮的堿性有機溶劑,如果采用胺分析專用柱進行分析,則效果更好。
1.2 進樣方法
GC法包括溶液直接進樣和頂空進樣兩種進樣方法。通常情況下,沸點低的溶劑建議采用頂空進樣法,沸點高的溶劑可以采用溶液直接進樣法,當(dāng)樣品本身對測定有影響時,也建議采用頂空進樣法。
1.3 檢測器的選擇
一般選用FID檢測器,對含鹵素的有機溶劑如氯仿等,采用ECD檢測器可得到更高的靈敏度。通??筛鶕?jù)藥物溶劑的殘留情況選擇合適的檢查方法。當(dāng)需要檢查的有機溶劑數(shù)量不多,且極性差異較小時,可選擇毛細管色譜柱-頂空進樣-等溫法。當(dāng)需要檢查的有機溶劑數(shù)量較多,且極性、沸點差異較大時,可選擇毛細管色譜柱-頂空進樣-程序升溫法;也可選擇填充柱或適宜極性的毛細管柱直接進樣法。
2、方法學(xué)驗證
2.1系統(tǒng)適用性試驗
柱效:用被測物的色譜峰計算,填充柱法的理論板數(shù)應(yīng)大于1000,毛細管色譜柱的理論板數(shù)應(yīng)大于5000。
分離度:色譜圖中被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
重復(fù)性:以內(nèi)標(biāo)法測定時,對照品溶液連續(xù)進樣5次,所得被測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 應(yīng)不大于5%;以外標(biāo)法測定時,所得被測物峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 應(yīng)不大于10%。
2.2專屬性
對各種殘留溶劑定位和進行混合溶劑的分離度試驗,分離度應(yīng)大于1.5。同時空白溶劑對被測溶劑無干擾。
2.3線性
至少制備6個濃度(如定限,10%,20%,40%,60%,80%,100%,120%殘留溶劑限度水平),相關(guān)系數(shù)不小于0.99。
2.4檢測限和定量限
檢測限為信噪比3~5時相應(yīng)濃度或注入儀器的量。定量測定時需驗證定量限,其限度為信噪比10~15時相應(yīng)濃度或注入儀器的量。定量限應(yīng)不高于殘留溶劑限度的50%。